8th Cuban Congress on Microbiology and Parasitology, 5th National Congress on Tropical Medicine and 5th International Symposium on HIV/aids infection in Cuba

Title

OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN ANTICUERPO MONOCLONAL DE RATÓN DIRIGIDO CONTRA PRODUCTOS DE EXCRECIÓN – SECRECIÓN (PE/S) DE Fasciola sp.

Authors

Jhon Carlos Castaño Osorio , Delia Piedad Recalde Reyes , Carlos Andrés Rodríguez Salazar , German Téllez .

Abstract


Introducción: La tecnología de generación de anticuerpos monoclonales (AcM) es una herramienta útil para el estudio de las enfermedades parasitarias, como la Fasciolosis. Objetivo: Desarrollary caracterizarun Anticuerpo Monoclonal especifico contra productos de Excreción /Secreción (PE/S) de Fasciola sp. Materiales y métodos:  se empleó la técnica clásica de fusión celular (con el agente fundente PEG Hybri-Max, 50%(p/v) wt 1450) entre mieloma murino SP2/0-Ag14 y células esplénicas provenientes de ratones BALB/C hembras de 2 meses de edad, inmunizadas con el esquema de 4 inoculaciones intraperitoneales de 100uL : 2 con adyuvante completo de Freund y 2 con adyuvante incompleto de Freund mas los PE/S de Fasciola sp., en relación 1:1; las inmunizaciones se realizaron cada 7 días, con un refuerzo final de amplificación administrado por vía endovenosa, con solución salina más PE/S relación 1:1. Se evaluó la estabilidad de la línea secretora E1B2D1 en cultivo celular y pases de la misma en ratones. El AcM E1B2D1 fue obtenido a partir de líquido ascítico purificado por cromatografía de afinidad con proteína G sefarosa (SIGMA, Aldrich), empleando el tampón glicina HCl 100mM pH 2,7. Resultados: Una vez purificado se determinó el isotipo del AcM E1B2D1,  que correspondió  a una IgG2a, cadena kappa. Posteriormente se evaluó la capacidad de reconocimiento del AcM E1B2D1 por medio de técnicas inmunoenzimáticas ELISA, Inmunotransferencia e Inmunohistoquimica. La línea hibrida secretora E1B2D1 se  depositado en el banco de células, del Centro de Investigaciones Biomédicas de la Universidad del Quindío.  Conclusión: Se pudo establecer un híbridoma de ratón secretor estable del AcM E1B2D1